Hüceyrə kulturalarının çirklənməsi asanlıqla hüceyrə mədəniyyəti laboratoriyalarında ən ümumi problemə çevrilə bilər və bəzən çox ciddi nəticələrə səbəb ola bilər.Hüceyrə mədəniyyətinin çirkləndiriciləri iki kateqoriyaya bölünə bilər: orta, serum və su çirkləri, endotoksinlər, plastifikatorlar və yuyucu vasitələr kimi kimyəvi çirkləndiricilər və bakteriya, qəliblər, mayalar, viruslar, mikoplazmalar kimi bioloji çirkləndiricilər.Digər hüceyrə xətləri ilə çirklənmişdir.Çirklənməni tamamilə aradan qaldırmaq mümkün olmasa da, onun mənbəyini hərtərəfli başa düşmək və yaxşı aseptik üsullara riayət etməklə onun tezliyi və şiddətini azaltmaq olar.
1.Bu bölmə bioloji çirklənmənin əsas növlərini təsvir edir:
Bakterial çirklənmə
Kalıp və viruslarla çirklənmə
Mikoplazma ilə çirklənmə
Maya çirklənməsi
1.1 Bakterial çirklənmə
Bakteriyalar hər yerdə yayılmış təkhüceyrəli mikroorqanizmlərin böyük qrupudur.Onların diametri adətən bir neçə mikrondur və kürələrdən tutmuş çubuqlara və spirallara qədər müxtəlif formalarda ola bilər.Onların hər yerdə olması, ölçüsü və sürətli böyümə sürətinə görə bakteriyalar, maya və kiflərlə birlikdə hüceyrə mədəniyyətində ən çox yayılmış bioloji çirkləndiricilərdir.
1.1.1 Bakterial çirklənmənin aşkarlanması
Bakterial çirklənmə mədəniyyətin yoluxmasından bir neçə gün sonra vizual müayinəsi ilə asanlıqla aşkar edilir;
Yoluxmuş mədəniyyətlər adətən buludlu görünür (yəni, bulanıq), bəzən səthində nazik bir film var.
Mədəniyyət mühitinin pH-da qəfil enmələrə də tez-tez rast gəlinir.
Aşağı güclü mikroskop altında bakteriyalar hüceyrələr arasında kiçik, hərəkət edən qranullar kimi görünür və yüksək güclü mikroskop altında müşahidə ayrı-ayrı bakteriyaların formalarını həll edə bilər.
1.2 Kalıp və Virusla çirklənmə
1.2.1 Kalıbın çirklənməsi
Kalıplar hif adlanan çoxhüceyrəli filamentlər şəklində böyüyən göbələk krallığının eukaryotik mikroorqanizmləridir.Bu çoxhüceyrəli filamentlərin birləşdirici şəbəkələri koloniya və ya miselyum adlanan genetik olaraq eyni nüvələri ehtiva edir.
Maya çirklənməsinə bənzər şəkildə, kulturanın pH-ı çirklənmənin ilkin mərhələsində sabit qalır və kultura daha ciddi şəkildə yoluxduqca və bulanıqlaşdıqca sürətlə artır.Mikroskop altında miselyum adətən filamentvari olur, bəzən sıx spor qrupları şəklindədir.Bir çox göbələklərin sporları hərəkətsiz fazalarında son dərəcə sərt və əlverişsiz mühitlərdə yaşaya bilir və yalnız düzgün böyümə şəraiti ilə qarşılaşdıqda aktivləşir.
1.2.2 Viruslarla yoluxma
Viruslar çoxalma üçün ev sahibi hüceyrənin mexanizmlərini ələ keçirən mikroskopik yoluxucu agentlərdir.Onların olduqca kiçik ölçüləri onların kulturada aşkarlanmasını və hüceyrə mədəniyyəti laboratoriyalarında istifadə olunan reagentlərdən çıxarılmasını çətinləşdirir.Əksər viruslar sahiblərinə qarşı çox ciddi tələblərə malik olduğundan, onlar adətən ev sahibindən başqa növlərin hüceyrə mədəniyyətlərinə mənfi təsir göstərmirlər.
Bununla belə, virusla yoluxmuş hüceyrə kulturalarının istifadəsi laboratoriya işçilərinin sağlamlığı üçün ciddi risk yarada bilər, xüsusən də laboratoriyada insan və ya primat hüceyrələri yetişdirilirsə.
Hüceyrə mədəniyyətlərində virus infeksiyası elektron mikroskopiya, antikorlar dəsti ilə immunoqrafik, ELISA və ya müvafiq viral primerlərlə PCR ilə aşkar edilə bilər.
1.3 Mikoplazma ilə çirklənmə
Mikoplazmalar hüceyrə divarları olmayan sadə bakteriyalardır və onların özünü çoxaldan ən kiçik orqanizmlər olduğu düşünülür.Həddindən artıq kiçik ölçülərinə görə (adətən 1 mikrondan az) mikoplazma olduqca yüksək sıxlığa çatana və hüceyrə mədəniyyətlərinin pisləşməsinə səbəb olana qədər aşkar etmək çətindir;O vaxta qədər adətən infeksiyanın aşkar əlaməti olmur.
1.3.1 Mikoplazmanın çirklənməsinin aşkarlanması
Bəzi yavaş böyüyən mikoplazmalar hüceyrə ölümünə səbəb olmadan mədəniyyətlərdə davam edə bilər, lakin onlar kulturalardakı ev sahibi hüceyrələrin davranışını və metabolizmini dəyişdirirlər.
Xroniki mikoplazma infeksiyası süspansiyon kulturasında hüceyrə proliferasiya sürətinin azalması, doyma sıxlığının azalması və aglütinasiya ilə xarakterizə oluna bilər.
Bununla belə, mikoplazmanın çirklənməsini aşkar etməyin yeganə etibarlı yolu, floresan boyama (məsələn, Hoechst 33258), ELISA, PCR, immuno-boyanma, avtoradioqrafiya və ya mikrob testindən istifadə edərək mədəniyyəti müntəzəm olaraq yoxlamaqdır.
1.4 Maya ilə çirklənmə
Mayalar göbələk krallığının birhüceyrəli eukariotlarıdır, ölçüləri bir neçə mikrondan (adətən) 40 mikrona (nadir hallarda) qədər dəyişir.
1.4.1 Maya ilə çirklənmənin aşkarlanması
Bakterial çirklənmədə olduğu kimi, maya ilə çirklənmiş mədəniyyətlər də buludlu ola bilər, xüsusən də çirklənmə inkişaf etmiş mərhələdədirsə.Maya ilə çirklənmiş kulturaların pH-ı çirklənmə daha şiddətli hala gələnə qədər çox az dəyişir və bu mərhələdə pH adətən artır.Mikroskop altında maya fərdi yumurtavari və ya sferik hissəciklər kimi görünür və daha kiçik hissəciklər yarada bilər.
2. Çarpaz infeksiya
Mikrob çirklənməsi kimi ümumi olmasa da, bir çox hüceyrə xətlərinin HeLa və digər sürətlə böyüyən hüceyrə xətləri ilə geniş çarpaz çirklənməsi ciddi nəticələrə malik aydın şəkildə müəyyən edilmiş problemdir.Nüfuzlu hüceyrə banklarından hüceyrə xətləri alın, hüceyrə xətlərinin xüsusiyyətlərini mütəmadi olaraq yoxlayın və yaxşı aseptik üsullardan istifadə edin.Bu təcrübələr çarpaz çirklənmənin qarşısını almağa kömək edəcək.DNT barmaq izi, karyotipləmə və izotipləmə hüceyrə mədəniyyətinizdə çarpaz çirklənmənin olub olmadığını təsdiqləyə bilər.
Mikrob çirklənməsi kimi ümumi olmasa da, bir çox hüceyrə xətlərinin HeLa və digər sürətlə böyüyən hüceyrə xətləri ilə geniş çarpaz çirklənməsi ciddi nəticələrə malik aydın şəkildə müəyyən edilmiş problemdir.Nüfuzlu hüceyrə banklarından hüceyrə xətləri alın, hüceyrə xətlərinin xüsusiyyətlərini mütəmadi olaraq yoxlayın və yaxşı aseptik üsullardan istifadə edin.Bu təcrübələr çarpaz çirklənmənin qarşısını almağa kömək edəcək.DNT barmaq izi, karyotipləmə və izotipləmə hüceyrə mədəniyyətinizdə çarpaz çirklənmənin olub olmadığını təsdiqləyə bilər.
Göndərmə vaxtı: 01 fevral 2023-cü il