Hüceyrə mədəniyyətinin əsas üstünlüklərindən biri hüceyrə çoxalmasının fiziki kimyası (yəni temperatur, pH, osmotik təzyiq, O2 və CO2 gərginliyi) və fizioloji mühit (yəni hormon və qida konsentrasiyası) ilə manipulyasiya etmək qabiliyyətidir.Temperaturdan əlavə, mədəniyyət mühiti böyümə mühiti tərəfindən idarə olunur.
Kulturanın fizioloji mühiti onun fiziki və kimyəvi mühiti qədər aydın olmasa da, zərdab komponentlərinin daha yaxşı başa düşülməsi, çoxalma üçün tələb olunan böyümə faktorlarının müəyyən edilməsi və kulturada hüceyrələrin mikromühitinin daha yaxşı başa düşülməsi.(yəni hüceyrə-hüceyrə qarşılıqlı əlaqəsi, qaz diffuziyası, matrislə qarşılıqlı əlaqə) indi müəyyən hüceyrə xətlərinin zərdabsız mühitdə becərilməsinə imkan verir.
1.Mədəniyyət mühiti hüceyrə böyüməsinə təsir göstərir
Nəzərə alın ki, hüceyrə mədəniyyəti şərtləri hər bir hüceyrə növü üçün fərqlidir.
Müəyyən bir hüceyrə növü üçün tələb olunan mədəniyyət şəraitindən yayınmanın nəticələri anormal fenotiplərin ifadəsindən hüceyrə mədəniyyətinin tam uğursuzluğuna qədər dəyişir.Buna görə də, sizi maraqlandıran hüceyrə xətti ilə tanış olmağı və təcrübənizdə istifadə etdiyiniz hər bir məhsul üçün verilən təlimatları ciddi şəkildə yerinə yetirməyi tövsiyə edirik.
2.Hüceyrələriniz üçün optimallaşdırılmış hüceyrə mədəniyyəti mühiti yaratmaq üçün ehtiyat tədbirləri:
Mədəniyyət mühiti və serum (ətraflı məlumat üçün aşağıya baxın)
pH və CO2 səviyyələri (ətraflı məlumat üçün aşağıya baxın)
Plastik yetişdirin (ətraflı məlumat üçün aşağıya baxın)
Temperatur (ətraflı məlumat üçün aşağıya baxın)
2.1 Mədəni Vasitə və Serum
Kultura mühiti kultura mühitinin ən vacib hissəsidir, çünki o, hüceyrə böyüməsi üçün lazım olan qida maddələrini, böyümə faktorlarını və hormonları təmin edir və kulturanın pH və osmotik təzyiqini tənzimləyir.
İlkin hüceyrə kulturası təcrübələri toxuma ekstraktlarından və bədən mayelərindən əldə edilən təbii mühitlərdən istifadə edilməklə aparılsa da, standartlaşdırma ehtiyacı, media keyfiyyəti və artan tələbat qəti mühitin inkişafına səbəb oldu.Üç əsas media növü bazal media, azaldılmış serum mediası və serumsuz mediadır və onların serum əlavəsi üçün fərqli tələbləri var.
2.1.1 Əsas mühit
Gibco hüceyrə mədəniyyət mühiti
Əksər hüceyrə xətləri amin turşuları, vitaminlər, qeyri-üzvi duzlar və karbon mənbələri (məsələn, qlükoza) olan əsas mühitlərdə yaxşı böyüyür, lakin bu əsas media formulaları serumla tamamlanmalıdır.
2.1.2 Azaldılmış serum mühiti
Gibco Low Serum Medium ilə şüşə
Hüceyrə mədəniyyəti təcrübələrində zərdabın mənfi təsirlərini azaltmaq üçün başqa bir strategiya zərdab azaldılmış mühitdən istifadə etməkdir.Azaldılmış serum mühiti qida maddələri və heyvan mənşəli faktorlarla zəngin olan əsas mühit formuludur və bu, tələb olunan serumun miqdarını azalda bilər.
2.1.3 Serumsuz mühit
Gibco serumsuz vasitə ilə şüşə
Serumsuz mühit (SFM) serumu müvafiq qidalanma və hormon tərkibləri ilə əvəz etməklə heyvan serumunun istifadəsindən yayınır.Bir çox ilkin mədəniyyətlər və hüceyrə xətləri, Çin Hamster Yumurtalıq (CHO) rekombinant zülal istehsal xətti, müxtəlif hibridoma hüceyrə xətləri, həşərat xətləri Sf9 və Sf21 (Spodoptera frugiperda), həmçinin virus istehsalı üçün host üçün də daxil olmaqla, serumsuz mühit formulalarına malikdir. (məsələn, 293, VERO, MDCK, MDBK) və s. Serumsuz mühitdən istifadənin əsas üstünlüklərindən biri böyümə faktorlarının müvafiq kombinasiyasını seçməklə mühiti xüsusi hüceyrə növləri üçün seçici etmək imkanıdır.Aşağıdakı cədvəldə zərdabsız medianın üstünlükləri və mənfi cəhətləri verilmişdir.
Üstünlük
Aydınlığı artırın
Daha ardıcıl performans
Daha asan təmizləmə və aşağı axın emal
Hüceyrə funksiyasını dəqiq qiymətləndirin
Məhsuldarlığı artırın
Fizioloji reaksiyalara daha yaxşı nəzarət
Təkmilləşdirilmiş hüceyrə media aşkarlanması
Mənfi cəhəti
Hüceyrə növü üçün xüsusi mühit formuluna tələblər
Daha yüksək reagent təmizliyi lazımdır
Artımın yavaşlaması
2.2.1 pH səviyyəsi
Normal məməlilərin hüceyrə xətlərinin əksəriyyəti pH 7.4-də yaxşı inkişaf edir və müxtəlif hüceyrə xətləri arasındakı fərqlər kiçikdir.Bununla belə, bəzi transformasiya olunmuş hüceyrə xətlərinin bir az turşu mühitdə (pH 7.0 – 7.4) daha yaxşı inkişaf etdiyi, bəzi normal fibroblast hüceyrə xətlərinin isə bir qədər qələvi mühitə (pH 7.4 – 7.7) üstünlük verdiyi göstərilmişdir.Sf9 və Sf21 kimi həşərat hüceyrə xətləri pH 6.2-də ən yaxşı şəkildə böyüyür.
2.2.2 CO2 səviyyəsi
Böyümə mühiti mədəniyyətin pH-a nəzarət edir və pH-dakı dəyişikliklərə müqavimət göstərmək üçün mədəniyyətdəki hüceyrələri tamponlayır.Adətən, bu tamponlama üzvi (məsələn, HEPES) və ya CO2-bikarbonat əsaslı tamponların olması ilə əldə edilir.Mühitin pH-ı həll olunmuş karbon qazı (CO2) və bikarbonatın (HCO3-) incə balansından asılı olduğundan, atmosfer CO2-də dəyişikliklər mühitin pH-ını dəyişəcəkdir.Buna görə də, CO2-bikarbonat əsaslı tamponla tamponlanmış mühitdən istifadə edərkən, xüsusilə açıq mədəniyyət qablarında hüceyrələrin kultivasiyası və ya yüksək konsentrasiyalarda transformasiya edilmiş hüceyrə xətlərinin kultivasiyası zamanı ekzogen CO2-dən istifadə etmək lazımdır.Əksər tədqiqatçılar adətən havada 5-7% CO2 istifadə etsələr də, əksər hüceyrə mədəniyyəti təcrübələrində adətən 4-10% CO2 istifadə olunur.Bununla belə, hər bir mühit düzgün pH və osmotik təzyiqə nail olmaq üçün tövsiyə olunan CO2 gərginliyinə və bikarbonat konsentrasiyasına malikdir;əlavə məlumat üçün orta istehsalçının təlimatlarına müraciət edin.
2.3 Plastiklərin becərilməsi
Hüceyrə mədəniyyəti plastikləri müxtəlif hüceyrə mədəniyyəti tətbiqlərinə uyğun olaraq müxtəlif formalarda, ölçülərdə və səthlərdə mövcuddur.Hüceyrə kulturası tətbiqiniz üçün düzgün plastik seçməyinizə kömək etmək üçün aşağıdakı hüceyrə kulturası plastik səth bələdçisindən və hüceyrə mədəniyyəti qabı bələdçisindən istifadə edin.
Bütün Thermo Scientific Nunc hüceyrə mədəniyyəti plastiklərinə baxın (reklam linki)
2.4 Temperatur
Hüceyrə kulturası üçün optimal temperatur böyük dərəcədə hüceyrələrin təcrid olunduğu ev sahibinin bədən istiliyindən və daha az dərəcədə temperaturun anatomik dəyişikliklərindən (məsələn, dərinin temperaturu skelet əzələsinin temperaturundan aşağı ola bilər) asılıdır. ).Hüceyrə mədəniyyəti üçün həddindən artıq istiləşmə həddindən artıq istiləşmədən daha ciddi bir problemdir.Buna görə də, inkubatorda temperatur adətən optimal temperaturdan bir qədər aşağı müəyyən edilir.
2.4.1 Müxtəlif hüceyrə xətləri üçün optimal temperatur
İnsan və məməlilərin hüceyrə xətlərinin əksəriyyəti optimal böyümə üçün 36°C-dən 37°C-dək saxlanılır.
Həşərat hüceyrələri optimal inkişaf üçün 27°C temperaturda becərilir;aşağı temperaturda və 27°C ilə 30°C arasında olan temperaturda daha yavaş böyüyürlər.30°C-dən yuxarı həşərat hüceyrələrinin canlılığı azalır, 27°C-yə qayıtsa belə, hüceyrələr bərpa olunmur.
Quş hüceyrə xətlərinin maksimum böyüməsi üçün 38,5°C-yə ehtiyacı var.Bu hüceyrələr 37°C-də saxlanıla bilsələr də, daha yavaş böyüyəcəklər.
Soyuqqanlı heyvanlardan (məsələn, suda-quruda yaşayanlar, soyuq su balıqları) əldə edilən hüceyrə xətləri 15°C-dən 26°C-dək geniş temperatur diapazonuna dözə bilir.
Göndərmə vaxtı: 01 fevral 2023-cü il